實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Quantitative Real-time PCR）也稱(chēng) QPCR，是指在DNA 擴增反應中，以熒光化學(xué)物質(zhì)測單次聚合酶鏈式反應（PCR）循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀主要由樣品載臺、基因擴增熱循環(huán)組件、微量熒光檢測光學(xué)系統、微電路控制系統、計算機及應用軟件組成。其中基因擴增熱循環(huán)組件工作原理與傳統基因擴增儀大致相同，不同廠(chǎng)家不同型號的產(chǎn)品分別采用空氣加熱、壓縮機制冷、半導體加熱制冷等工作方式。微量熒光檢測系統由熒光激發(fā)光學(xué)部件、微量熒光檢測部件、光路、控制系統組成。
常用的熒光激發(fā)方式有兩種：鹵鎢燈和LED；熒光檢測元件常用兩種方式：光電倍增管和冷光CCD攝像機，光單色元件有濾光片和光柵。在實(shí)時(shí)PCR擴增過(guò)程中，熒光信號被收集，轉化為成為擴增和熔解曲線(xiàn)。具體數據就是基線(xiàn)，熒光閾值和Ct值。
CT值: qPCR擴增過(guò)程中，擴增產(chǎn)物的熒光信號達到設定的熒光閾值時(shí)的所對應的擴增循環(huán)數(Cycle Threshold)。
基線(xiàn):擴增曲線(xiàn)的水平部分(背景信號過(guò)高，可獨立設置)
在PCR早期，擴增處于理想情況下，循環(huán)數較少，產(chǎn)物積累少，產(chǎn)生熒光的水平不能與熒光本底背景明顯地區別，之后熒光的產(chǎn)生增加進(jìn)入指數期。
可以在PCR反應剛處于指數期的某一點(diǎn)上來(lái)檢測PCR產(chǎn)物的量，以此作為“一定產(chǎn)物量”，并且由此來(lái)推斷模板最初的含量。一定產(chǎn)物量對應的熒光信號強度，也就是熒光閾值。
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